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本DNA Ladder由9条线状双链DNA片段组成，适用于琼脂糖凝胶电泳中的DNA条带及分子量的分析。本制品已混有1×Loading Buffer，可直接用于凝胶电泳。本制品不建议用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。

本DNA Ladder的9个条带大小分别为100、250、500、750、1000、1500、2000、3000、5000bp，其中1000bp条带浓度约为30ng/μL，显示为亮带，其他各条带浓度约为10ng/μL，使电泳条带更容易辨认，可用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。

• 建议取3～5μL加入加样孔中（或按每毫米胶孔宽度上1μL量）。
  
• 建议用0.7%～1.2% Agarose，电压4～10V/cm，1×TAE或0.5×TBE进行琼脂糖凝胶电泳。
  
• 可以通过EB或者其他新型核酸染料进行染色，其中新型核酸染料可根据不同核酸染料的使用说明书进行配制操作，
  若使用预混法进行电泳时出现抹带可考虑减少核酸染料的加量，在紫外灯下观察电泳条带。
  
• 使用5×DNA Loading Buffer使用时请稀释至1×进行使用，即按照DNA∶5×DNA Loading Buffer＝4∶1的比例，混合DNA样品和上样缓冲液，混匀后直接加到凝胶加样孔中，即可进行电泳。

• 使用前请确保试剂已完全解冻并混匀。
  
• 使用高品质的琼脂糖，新配制的琼脂糖凝胶，并及时更换电泳缓冲液，以免影响电泳效果。
  
• 使用含有EB染料的琼脂糖凝胶进行电泳检测时，待溴酚蓝染料到约2/3处即可停止电泳，以防小条带脱离EB造成条带变暗。
  
• 如使用新型染料（GelRed）时，建议使用泡染法进行琼脂糖凝胶电泳检测。
  
• 琼脂糖凝胶的浓度对于DNA片段的分离效果至关重要。较高浓度琼脂糖凝胶对于短片段DNA的分离性能好，而较低浓度琼脂糖凝胶有利于长片段DNA的分离。可依据实际情况选择合适浓度的琼脂糖凝胶进行电泳，可参考下表对应关系：
  

  推荐胶浓度(%)	DNA片段大小(bp)	推荐胶浓度(%)	DNA片段大小(bp)
  0.5	1000～3000	1.2	4000～7000
  0.7	800～12000	1.5	200～3000
  1.0	500～10000	2.0	50～2000

• 5×DNA Loading Buffer使用时请稀释至1×进行使用（现用现配），DNA Ladder 5000(100bp～5kb)已混有1×DNA Loading Buffer，无需额外添加。
  
• TBE对于较小片段的分离效果更好。对于小于300bp的片段，在2%的琼脂糖凝胶上，TBE中的迁移速度更快；TAE适用于大片段的分离，大于2000bp的片段在TAE中的迁移速度更快；因此，TBE更适合小片段分离，所以小条带的分离度比较高，分的更开，相比于TBE，TAE对于超螺旋的DNA分辨率更高，可依据实际情况选择合适的缓冲性进行电泳。
  
• 本制品中已添加二甲苯氰和溴酚蓝两种电泳指示剂。二甲苯氰条带所处位置约为5000bp，溴酚蓝条带所处位置约为750～1000bp。

• DNA Marker条带缺失或者亮度问题
  
  • 琼脂糖凝胶：可能由于胶浓度、琼脂糖凝胶质量及保存不当导致问题出现；
    
    • 浓度：建议用1%-2%Agarose琼脂糖凝胶进行电泳。
      
    • 配制：建议在配制琼脂糖凝胶时，保证琼脂糖颗粒溶解完全，同时若采用预混法进行即加入核酸染料进行配制，需将完全溶解的琼脂糖凝胶倒入胶板后冷却2～3min后，再加入对应核酸染料，避免温度过高导致核酸染料蒸发损失；配制完成后需冷却凝结30～60min后才可进行使用。
      
    • 保存：建议琼脂糖凝胶现配现使用，若不能及时使用，需放置在缓冲液(TAE/TBE)中保存，防止凝胶中核酸染料分解，导致染色效率降低，不建议使用过夜的琼脂糖凝胶。
  • 跑胶类型：
    
    • 泡染法，可能是泡染的时间太长或太短，导致染色不完全或者核酸染料分解，建议泡染时间控制在30min左右。
      
    • 预混法，使用新型核酸染料（GelRed）进行电泳检测导致DNA Marker弥散，可优先选择泡染法进行实验；同时可能由于核酸染料灵敏度、点样孔宽度问题，可适当增加DNA Marker的上样量。
  • 电压：建议使用电压4～10V/cm，1×TAE或0.5×TBE进行琼脂糖凝胶电泳，电压过高可能会导致缓冲液温度过高，使Marker条带出现不规则现象。
• DNA Marker条带弯曲、波纹或呈哑铃状等问题
  
  • 琼脂糖凝胶：建议琼脂糖凝胶现配现使用，若不能及时使用，需放置在缓冲液(TAE/TBE)中保存，防止凝胶中核酸染料分解，导致染色效率降低，不建议使用过夜的琼脂糖凝胶。
    
  • 染料类型：
    
    • 若使用新型核酸染料（GelRed）进行电泳检测导致DNA Marker条带不规则的，可优先选择泡染法进行实验避免此类情况。
      
    • 由于新型染料的灵敏度较高，出现此种情况时，建议减少DNA Marker上样量，主要为Gelred与DNA结合后改变了DNA的空间结构，增大了DNA在电场中的迁移阻力，导致DNA分子在琼脂糖凝胶电泳中的速率变慢，出现弯曲、波纹等情况。
  • 电压：建议使用电压4～10V/cm，电压过高可能会导致缓冲液温度过高，使Marker条带出现不规则现象，同时检查电泳仪电压是否稳定。